流式细胞仪(flow cytometry,FCM)是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪,是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质(如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等)进行快速测量并可分类收集的高技术。
流动细胞仪主要有以下五部分构成:
01流动室及液体驱动系统
02激光光源及光束形成系统
03光学系统
04系统检测与储存、显示、分析系统
05细胞分选系统
其中,激光光源及光束形成系统中的激光激发是流式细胞仪中信号荧光的主要测定,荧光信号的强弱与激发光的强度和照射时间相关。激光是一种相干光源,它能提供单波长、高强度、高稳定性的光照,正是能达到这一要求的理想的激发光光源。
在激光光源和流动室之间有两个圆柱形透镜,将激光光源发出的横截面为圆形的激光光束聚焦成横截面较小的椭圆形激光光束(22μm×66μm),在这种椭圆形激光光斑内激光能量成正态分布,使通过激光检测区的细胞受照强度一致。
而光学系统则是由若干组透镜、小孔、滤光片组成,大致可分为流动室前和流动室后两组。
流动室前的光学系统由透镜和小孔组成,透镜和小孔(一般为2片透镜、1个小孔)的主要作用是将激光光源发出的横截面为圆形的激光光束聚焦成横截面较小的椭圆形激光光束,使激光能量成正态分布,使通过激光检测区的细胞受照强度一致,最大限度的减少杂散光的干扰。
流动室后的光学系统主要由多组滤光片组成,滤光片的主要作用是将不同波长的荧光信号送到不同的光电倍增管。
滤光片主要有三类:
01:长波通滤光片(LPF)--只允许特定波长以上的光线通过;
02:短波通滤光片(SPF)--只允许特定波长以下的光线通过;
03:带通滤光片(BPF)--只允许特定波长的光线通过。
不同组合的滤片可以将不同波长的荧光信号送到不同的光电倍增管(PMT),如接收绿色荧光(FITC)的PMT前面配置的滤光片是LPF550和BPF525;接收色橙红色荧光(PE)的PMT前面配置的滤光片是LPF600和BPF575;接收红色荧光(CY5)的PMT前面配置的滤光片是LPF650和BPF675。
流式细胞仪主要应用在对细胞的分选上。随着计算机技术,免疫学的发展以及单克隆抗体技术的发明,现在在生物学和医学、药学等领域的应用越来越广泛,如细胞动力学分析、细胞调亡、细胞分型、肿瘤的诊断、药物疗效分析等许多领域。
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